A la rebotica regresan por una noche Lourdes Cano, la farmacéutica (Concha Cueto); Adolfo Segura, el ex marido galán y vividor (Carlos Larrañaga); y sus hijos, el responsable Kike (Miguel Angel Garzón), el pícaro pelirrojo Guille (Julián González) y la pequeña Fany (Alicia Rozas). Les acompañan de nuevo la cándida manceba Sandra (Emma Ozores); Encarni, la policía (María Garralón); y Carlos, el eterno novio-amigo de Lourdes (Alvaro de Luna).
En 'Farmacia de Guardia', dirigido por Manuel Estudillo y que se ha rodado dentro de los actos de celebración del veinte aniversario de Antena 3, Lourdes está a punto de perder su farmacia porque todo el edificio va a ser vendido para convertirlo en apartamentos de lujo y ella no puede hacer frente al elevado alquiler que le piden, pues hasta ahora pagaba uno de renta antigua.
Por ello, reúne a toda su familia en una cena en la rebotica para comunicarles la noticia y allí van llegando los personajes, tres lustros después de su despedida de 'Farmacia de Guardia', para protagonizar una vez más una trama cómica salpicada de malentendidos y caracterizada por su tono cálido y un lenguaje para todos los públicos.
Los actores han coincidido en recordar con emoción a Antonio Mercero, creador de la serie que 'abrió el camino' a la ficción española cuando las cadenas privadas daban sus primeros pasos y que, en su última emisión (diciembre de 1995), logró un récord de audiencia aún no superado en la televisión de nuestro país al ser vista por 11,5 millones de espectadores.
También han destacado que al rodar la película todos se han sentido como si hubieran vuelto a la serie 'tras un descanso de quince días' pero, sobre todo, la ilusión de reencontrarse después de quince años y encontrar que 'la química no se ha perdido', como ha dicho Miguel Angel Garzón. No obstante, Concha Cuetos ha precisado que cuando se puso punto y final a la serie tras cinco años ininterrumpidos 'fue una liberación', tras un lustro 'casi viviendo' en el rodaje. 'Se terminó cuando tenía que terminar, en lo más alto', ha añadido.